اثر انجماد شیشه ای بر تعداد و حیات توده سلول داخلی بلاستوسیست های گاوی رشد یافته در آزمایشگاه

سابقه و هدف: از کشت توده سلول داخلی بلاستوسیست در محیط مناسب، سلول های بنیادی جنینی به دست می آید. از این سلول ها به عنوان یک ابزار تحقیقاتی در تولید حیوانات ترانس ژنیک و مطالعه تکوین جنین استفاده می شود. با روش انجماد شیشه ای می توان بلاستوسیست های تولید شده را برای استفاده های بعدی نگهداری کرد. هدف از این مطالعه بررسی تعداد و میزان حیات سلول های توده داخلی بلاستوسیست های منجمد شده به روش انجماد شیشه ای است. به امید این که بتوان از جنین های منجمد شده نیز جهت تولید سلول های بنیادی استفاده نمود.مواد و روش ها: پس از بلوغ ولقاح آزمایشگاهی تخمک های نابالغ گاو، جنین ها در محیط ham's f10 بر لایه سلول های vero به مدت 7 روز در دمای co2 %5 , 39°c کشت داده شد. 500 عدد بلاستوسیست انتخاب و به دو گروه تقسیم گردید. یک گروه به عنوان شاهد و گروه دیگر به روش انجماد شیشه ای (40 درصد اتیلن گلیکول، 18 درصد فایکل، 3/0 مولار ساکارز) منجمد شد. پس از ذوب، جنین ها به مدت 24 ساعت کشت داده شدند و جنین های متسع شده، انتخاب و همراه با گروه شاهد با روش immunosurgery توده سلولی داخلی آن ها جدا شد. برای بررسی حیات سلول ها از رنگ آمیزی تریپان بلو استفاده گردید.یافته ها: درصد حیات توده سلول داخلی بلاستوسیست های روز هفتم در گروه شاهد و انجماد به ترتیب 96درصد و 85 درصد و میانگین تعداد سلول ها به ترتیب17.4±3 و 14±2 بود. درصد حیات توده سلول داخلی بلاستوسیست های روز هشتم در گروه شاهد و انجماد به ترتیب 95درصد و 82 درصد و میانگین تعداد سلول ها به ترتیب 18.6±3 و 15.±2 بود.استنتاج: درصد حیات و تعداد سلول های توده داخلی بلاستوسیست های گروه شاهد و انجماد درروز هفتم و هشتم دارای اختلاف معنی داری است. به روش انجماد شیشه ای درصد حیات و تعداد سلول ها به طور معنی داری کاهش می یابد. لذا بهتر است که جهت تولید سلول های بنیادی از بلاستوسیست های منجمد نشده استفاده شود.